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凱氏定氮儀是根據(jù)蛋白質(zhì)中氮的含量恒定的原理,通過測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質(zhì)含量的儀器。因其蛋白質(zhì)含量測量計算的方法叫做凱氏定氮法,故被稱為凱氏定氮儀,又名定氮儀、蛋白質(zhì)測定儀、粗蛋白測定儀。凱氏定氮儀儀器用凱氏方法檢測谷物、食品、飼料、水、土壤、淤泥、沉淀物和化學品中的氨、蛋白質(zhì)氮含量、酚、揮發(fā)性脂肪酸、二氧化硫、乙醇等含量。具有相當好的性價比,僅僅滴定過程需要人工操作一下,非常適合實驗室及檢驗機構(gòu)常規(guī)檢測。廣泛用于食品、農(nóng)作物、種子、土壤、肥料等樣品的含氮量或蛋白質(zhì)含量分析。
凱氏定氮儀原理:
將有機化合物與硫酸共熱使其中的氮轉(zhuǎn)化為硫酸銨。在這一步中,經(jīng)常會向混合物中加入硫酸鉀來提高中間產(chǎn)物的沸點。樣本的分析過程的終點很好判斷,因為這時混合物會變得無色且透明(開始時很暗)
在得到的溶液中加入少量氫氧化鈉,然后蒸餾。這一步會將銨鹽轉(zhuǎn)化成氨。而總氨量(由樣本的含氮量直接決定)會由反滴定法確定:冷凝管的末端會浸在硼酸溶液中。氨會和酸反應,而過量的酸則會在甲基橙的指示下用碳酸鈉滴定。滴定所得的結(jié)果乘以特定的轉(zhuǎn)換因子就可以得到結(jié)果。
凱氏定氮儀優(yōu)點
對于所有樣品的測定都適用是凱氏定氮法的優(yōu)點。能夠在測定動、植物的各種組織、器官以及食品、土壤等成分復雜的蛋白質(zhì)的含量時被使用。特別是樣品溶液渾濁,用其他方法不能測定,可靠的結(jié)果能夠通過采用凱氏法獲得。
凱氏定氮儀缺點
1、和理論含氮量相比,含堿性氨基酸、酰胺和小分子量氨基酸(甘氨酸、丙氨酸等)偏多的蛋白質(zhì)含氮量明顯非常高,導致測定結(jié)果偏高。
2、有著相當繁瑣的操作過程,要求操作者具有很高的技術(shù)熟練度,實驗室空氣中氨含量會對其產(chǎn)生影響。
3、測定值會由于樣品中的非蛋白氮而偏高,所以,在測定前需要先將與樣品共存的非蛋白氮去除。
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